2.正确定位教学目标 以上原理和方法中，“初步获取血红蛋白的原理和方法”比较简单，又有必修的基础，因此学生容易理解；凝胶色谱法的原理容易理解，但操作复杂，难度较高，是学生学习的重点；电泳的原理和方法比较复杂，绝大多数学校目前缺乏相应的实验设备，而且是用于鉴定分离后蛋白质纯度的后续实验，因此可作为选学内容。基于以上分析，特确定如下的教学目标、教学的重点和难点。 2．1 教学目标 （1）说出从血液中初步获取血红蛋白的原理和方法。 （2）说明凝胶色谱法的原理和方法。 （3）说出电泳的基本原理和方法。 （4）进行样品的预处理。 （5）运用凝胶色谱法对血红蛋白进行分离纯化。 2．2 教学重点和难点 教学重点：凝胶色谱法的原理和方法。 教学难点：样品的预处理；色谱柱的装填；纯化分离操作。 3.实验前准备 3．1 几种重要实验试剂的配制及注意事项 3．1．1 磷酸缓冲液（20mmol/L）的配制及注意事项 配制步骤 配制的溶液 配制方法 注意事项 ① 0．2 mol/L的Na2HPO4溶液 将71．64 g 的Na2HPO4·12H20充分溶解于1000 mL的蒸馏水中 在混合两种溶液时，注意用酸度计或pH试纸检测，并调节溶液的pH在7．0左右 ② 0．2mol/L的 NaH2PO4溶液 将 31．21 g 的NaH2PO4·2H20充分溶解于1000 mL的蒸馏水中充分溶解 ③ pH约为7．0的20mmol/L磷酸缓冲液 取61 mL步骤①中配制的Na2HPO4溶液与39 mL步骤②中配制的NaH2PO4溶液混合 3．1．2 丙烯酰胺和N, N-甲叉双丙烯酰胺的配制及注意事项 将29 g丙烯酰胺和1 g N, N-甲叉双丙烯酰胺溶于总体积为70 mL的水中，搅拌过夜使之充分溶解。注意事项：丙烯酰胺和双丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可通过皮肤吸收，因此，操作时需要戴上手套和防毒面具，而且在通风橱内或通风处进行。价格较低的这两种药物中含有一些金属离子，为除去这些金属离子，可以在丙烯酰胺溶液中加入大约0．2倍体积的单床混合树脂，搅拌放置一夜后，再用Whatman 1号滤纸过滤就可以纯化。储存期间，由于光或碱的催化作用，丙烯酰胺和双丙烯酰胺会缓慢转化成丙烯酸和双丙烯酸，因此，应将配制好的溶液置于棕色瓶中，置于4 ℃保存，并且使用前应检查该溶液的pH，以确保pH不超过7．0。 3．1．3 SDS的配制及注意事项 将SDS用去离子水配制成10%的贮存液，于室温保存。注意事项：市售的SDS化学纯度不够，需要重结晶后使用。重结晶方法如下：称取20 g SDS,放入500 mL圆底烧瓶中，加半勺活性炭及300 mL无水乙醇，搅拌，摇匀。烧瓶上接一个小冷凝管。在水浴上加热至乙醇微沸，回流约10min，用热过滤漏斗趁热过滤。滤液应透明无色。滤液冷却至室温后，移至-20 ℃过夜。第二天，通过预冷的布氏漏斗抽滤，用少量-20 ℃无水乙醇洗沉淀3次，尽量抽干，将结晶置真空干燥器中干燥或40 ℃烘箱中烘干。 3．2 凝胶色谱柱的制作和装填 3．2．1凝胶色谱柱的制作
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